Práctica 5: Recuento de hematíes.

·         Objetivo:

Se basa en la dilución de la sangre total capilar o anticoagulada con EDTA, en líquido de Hayem. Vamos a calcular el valor total de recuento de hematíes y para ello tendremos en cuenta el área contada, la dilución utilizada y la altura de la cámara utilizada. Al igual que ocurre en el recuento de leucocitos este es un método poco usado debido al elevado nivel de error que presenta.

·         Materiales y reactivos:

- Microscopio
- Pipeta de 20 µl
- Cámara de Neubauer y cubrecámara
- Sangra anticoagulada
- Papel de filtro
- Lancetas

 -Líquido diluyente Hayem, el cual contiene cloruro sódico para que sean isotónicos y evitar hemólisis, e incorpora citrato sódico como anticoagulante y un antiséptico como la formalina.
- Tubo de ensayo
- Gradilla
- Puntas de pipeta

·         Ténica:

1. Primeramente vamos a preparar un tubo de ensayo  con 4 ml de líquido de Hayem y lo depositamos en un tubo de ensayo.

2. Procedemos a la punción capilar con la lanceta en la yema del dedo. Luego con la micropipeta de 20 microlitos, pipeteamos la sangre, limpiamos la sangre adherida en la parte exterior de la punta con una gasa sin arrastrar la sangre del interior y ponemos en el tubo de ensayo con el dilyente. En la parte superior del tubo de lava varias veces con diluyente el interior de la punta de pipeta para arrastrar bien la sangre.

3. A continuación, tapamos el tubo de ensayo con papel de parafina y homogeneizamos lentamente la muestra por el inversión 

4. Montamos la cámara, colocamos el cubrecámara.

5.Vamos a llenar uno de los retículos de cámara por un pequeño hueco que hemos dejado para que, con ayuda de la micropipeta, se llene por capilaridad. (Debe de llenarse de forma que el líquido ocupe toda la superficie).

6. Una vez que la cámara está montada, tenemos que dejarla reposar unos 3 minutos para que los hematíes que están suspendidos, sedimenten y se pueda proceder de manera correcta al recuento.

7. Procedemos a la observación a través del microscopio, con el objetivo de 10x enfocamos y con el de 20x observamos la distribución de las células. (Si no están uniformemente distribuidos debemos repetir la técnica)

8. Para hacer el recuento de hematíes lo haremos con el objetivo de 40x.

 Recuento de hematíes

El recuento de hematíes se va a hacer en el cuadrado central, pero solo en los cuadrados de las cuatro esquinas y en central. Cada cuadrado mediano (del central) que vamos a contar tiene 16 cuadrados pequeños.

¿  En qué sentido se cuentan los hematies?

RESULTADOS:

En el primer cuadrado hay 90 hematíes

En el segundo cuadrado hay 78 hematíes

En el central hay 75 hematíes

En el tercer cuadrado hay 80 hematíes

En el cuarto cuadrado hay 79 hematíes

Para calcular los hematíes que hay en la sangre diluida por mm³, vamos a utilizar la siguiente fórmula:(Htotal1 + Htotal2 + Htotal3 + Htotal4 + Htotal5) X 10000.

SOLUCIÓN:  4.020000 mm3