PRÁCTICA 6: RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS.

FUNDAMENTO:

Consiste en hacer el recuento en una dilución de sangre entera anticoagulada. Es un método poco usado debido al elevado error que presenta. La técnica consiste en diluir sangre anticoagulada con EDTA, en líquido de Turck y el recuento de las células mediante hemocitómetro o cámara de recuento utilizando un microscopio óptico. Para calcular el valor total de recuento tendremos en cuenta la dilución utilizada, el área contada y la altura de la cámara utilizada.

MATERIALES:
Microscopio.

Cámara de Neubauer.

Pipetas de 20 ul y puntas.

Lanceta.

REACTIVOS:

Liquido de turk: Cuya composición es la siguiente: 2 ml de ácido acético glacial, 1 ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1 %  y 100 ml de agua destilada.

MUESTRA:
Sangre anticoagulada con EDTA.

TÉCNICA:

1. Preparar un tubo de ensayo con 0,38 ml de líquido de Turck.
2. Con una micropipeta de 20μl, pipetear la sangre, limpiar la sangre adherida en la parte exterior de la punta con una gasa o papel de filtro sin arrastrar sangre del interior y ponerla en el tubo de ensayo con el diluyente. Lavar varias veces con diluyente el interior de la punta de pipeta para arrastrar bien la sangre. De ésta manera hemos efectuado una dilución al 1/20. 

3.Tapar el tubo de ensayo con papel de parafina y se mezcla suavemente.

4. Llenar la cámara por capilaridad.

5. Dejar que repose durante 5', para que sedimenten los leucocitos.

6. Con el objetivo de 10x enfocar, con el de 20x se observa la distribución de las células (Si no están uniformemente distribuidos debemos repetir la técnica).

7. Enfocar con 40x. Contar los leucocitos presentes en 16 cuadros, de los 4 cuadros grandes situados en las esquinas de la cámara.

8. Para ello se empieza por el cuadrado de la parte superior izquierda, realizando el recuento del mismo modo que se hace para hematíes.

9. No contar partículas extrañas ni pequeñas burbujas. Para realizar un recuento correcto y no contar leucocitos por segunda vez, si existen células sobre los bordes exteriores de un cuadrado, se cuentan solo aquellos situados sobre las líneas superior e izquierda.

10. Una vez contados los 4 cuadrados grandes de las esquinas de la cámara, se suman todos los leucocitos contados en ellos para obtener el total de células observadas.

11. Calcular la cifra de leucocitos de la muestra (expresado en leucocitos por mm3 de sangre) teniendo en cuenta la dilución realizada y el volumen de los cuadros.

RESULTADOS:

En el primer cuadrado hay 29 leucocitos

En el segundo cuadrado hay 35leucocitos.

En el tercer cuadrado hay 32leucocitos.

En el cuarto cuadrado hay 39 leucocitos.

Para calcular los leucocitos que hay en la sangre diluida por mm³, vamos a utilizar la siguiente fórmula:

(Ltotales1 + Ltotales2 + Ltotales3 + Ltotales4) X 50

Solución: 6750 mm3