PRÁCTICA Nº 16 PROTEINOGRAMA.


FUNDAMENTO
Las proteínas, moléculas anfóteras, en medio básico adquieren una carga global negativa que hace que migren del cátodo hacia el ánodo cuando son sometidas a un proceso electroforético. Como consecuencia de esta migración, se obtienen habitualmente cinco fracciones correspondientes a diferentes proteínas plasmáticas con carga negativa decreciente: Albúmina la más negativa, alfa uno globulinas, alfa 2 globulinas, beta globulinas, gamma globulinas, las menos negativas.


Objetivo
Realizar una electroforesis de proteínas plasmáticas.

MATERIALES:
Alimentador de electroforesis
Cubeta de electroforesis
Aplicador de muestras
Tiras de acetato de celulosa
Láminas Mylar
Papel de filtro.
Bisturí

REACTIVOS:

Solución Tampón ( Hipurato)
Colorante Rojo Ponceau
Decolorante Rojo Ponceau
Solución transparentadora
Solución disolvente

PROCEDIMIENTO:
1. Echar el tampón en las cubetas de electroforesis e igualar la cantidad.
2. Echar el tampón y sumergir todas las tiras durante 10 minutos como mínimo.

3. Sacar y secar con papel de filtro.

4. Montar los puentes con las tiras, dejando el corte abajo a la derecha.

5. Depositar las muestras con el aplicador en las tiras ya en el puente.

6. Poner los puentes en las cubetas que vaya la muestra desde el negativo(rojo) al positivo(negro)

7. Se pone a 200 V durante 35minutos

8. Sacar y sumergir en colorante Rojo Ponceau 5 minutos , en ácido Cítrico  hasta que quede blanco y transparentador durante  1 minuto. 

9. Sobre una superficie de Mylar film cortar bordes y eliminar exceso de transparentador.

10. Calentar en estufa durante 10 minutos a 80º 

11. Procedemos a la lectura.

   

RESULTADOS: