Fundamento.
-La resistencia osmotica eritrocitaria es una tecnica realizada para el estudio de las membranopatias eritrocitarias.
Material y reactivos.
-Solución madre de NaCl
de 50 g/L en agua bidestilada .
-Soluciones de trabajo .
-Muestra de sangre total
.
-Tubos de centrífuga .
-Espectofotómetro .
-Centrífuga .
-Papel milimetrado .
Procedimiento.
1.A partir de la
solución madre preparamos las siguientes soluciones de trabajo.
-Solución 1 (1 G/L de
NaCl) : 1 mL sol. madre + 99 mL de agua bidestilada .
-Solución 2 (3 G/L de
NaCl) : 3 mL sol. madre + 97 mL de agua bidestilada .
-Solución 3 (4 G/L de
NaCl) : 4 mL sol. madre + 96 mL de agua bidestilada .
-Solución 4 (5 G/L de
NaCl) : 5 mL sol. madre + 95 mL de agua bidestilada .
-Solución 5 (6 G/L de
NaCl) : 6 mL sol. madre + 94 mL de agua bidestilada .
-Solución 6 (8 G/L de
NaCl) : 8 mL sol. madre + 92 mL de agua bidestilada .
-Solución 7 (10 G/L de
NaCl) : 10 mL sol. madre + 90 mL de agua bidestilada .
2.Colocamos 5 mL de cada
solución en una batería de tubos de centrífuga .
3.Añadimos 25
microlitros de sangre total y agitamos y dejamos a temperatura ambiente durante
45-60 minutos.
4.Se centrifuga a 3000
rpm durante 10 minutos y separamos el sobrenadante (una vez incubado).
5.Medimos el grado de
hemólisis del sobrenadante en un espectofotómetro a una longitud de onda de 540
nm sonsiderando el rubo con 1 g/L de NaCl como el 100% de hemólisis y el de 10
g/L de NaCl como el blanco (0% de hemólisis)
6.Finalmente representamos en un papel milimetrado en
abscisas los g/L de NaCl , y en ordenadas el porcentaje de hemólisis de
los diferentes tubos , por interpolación se determinan cuál es la concentración
de NaCl necesaria para producir una hemólisis del 50 % (H50) , siendo ese valor
equivalente a la FOE
RESULTADOS:
No hay comentarios:
Publicar un comentario