PRÁCTICA Nº 25: TSH



Objetivos:

Determinar cuantativamente la hormona estimulante del tiroides (TSH)


MATERIALES:

• Lector de placas microtitter
• Agua
• Pipetas

REACTIVOS

• Placa de micropocillos cubiertos con Ac monoclonal murino anti- TSH.
• Set de patrones liofilizados: 0,0,1,0,5,2,5y 10     
• Conjugado enzimático (13mL)
• Sustrato TMB (11 mL)                                        
• Solución de parada: HCl 1 N (11 mL)
  
  

MUESTRA

• Suero

TÉCNICA:
1. Pipetear 100 μL de los patrones, del control y de la muestra en los pocillos correspondientes.
2. Agregar 100 μL de conjugado en cada pocillo
3. Mezclar agitando al menos durante 30 segundos.

4. Incubar durante 60 minutos a temperatura ambiente.
5. Volcar el contenido de los pocillos.
6. Lavar los pocillos con agua destilada hasta llenarlos. Repetir el lavado cinco veces.
7. Tras el último lavado, eliminar el contenido de agua de los pocillos sacudiéndolos contra un papel absorbente.
8. Agregar 100 μL de solución TMB (sustrato cromogénico). El color vira a azul.
9. Incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos.
10. Detener la reacción añadiendo 100 μL de solución de parada
11. Mezclar con cuidado durante 30 segundos. El color vira completamente a amarillo.

12. Determinar la absorbancia a 450 nm con un lector de micropocillos durante los 15 minutos siguientes.

RESULTADOS: