PRÁCTICA Nº17 LDH

FUNDAMENTO

La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima, distribuida por todo el organismo humano. Las mayores concentraciones de LDH se encuentran en el hígado, corazón, riñón, músculo esquelético y eritrocitos.

El nivel de LDH en suero esta elevado en pacientes con enfermedades del hígado, infartos de miocardio, alteraciones renales, distrofias musculares y anemias.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

Fundamento: La Lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del piruvato por el NADH, según la siguiente reacción:

Piruvato + NADH+ H+____LDH_______> L-Lactato + NAD+

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de LDH en la muestra ensayada.

OBJETIVO

Determinar cuantitativamente la lactato deshidrogenasa.

MATERIALES:

• Reactivos
• Puntas de pipeta
• Baño termostático
• Espectofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm
• Cubetas
• Porta cubetas
• Gradilla

REACTIVOS:

• R1 Tampón: Imidazol Piruvato
• R2 Substrato: NADH

MUESTRA:

• Suero

APARATOS :

• Espectofotómetro o analizador para lecturas y baño termostático

¿COMO SE UTILIZA?

1. Encender el aparato
2. Seleccionar la longitud de onda indicada: 340 nm.
3. Esperar aproximadamente 15 minutos
4. Programar los datos que indica la técnica teniendo en cuenta que en primer lugar se debe pulsar el número y a continuación, la tecla correspondiente al parámetro.
5. FACTOR: Indicado por la técnica.
6. SEC/INCUB: Tiempo transcurrido desde que se pone la muestra en el reactivo hasta que se toma la primera lectura.
7. SEC Δ: Tiempo entre lecturas
8. ºC: Temperatura de trabajo.
9. Δ/ nº Δ: Número de intervalos (Número de lecturas menos 1).
10. Al programar cada uno de estos parámetros el piloto correspondiente debe iluminarse internamente indicando así que ha entrado en memoria.
11. Una vez programados todos los datos anteriores, introducir la cubeta con el blanco (cero).
12. Ajustar el mando SENSIBILIDAD de modo que los pilotos SENSITIVITY se apaguen.
13. Pulsar ZERO.
14. Extraer la cubeta con el blanco e introducir el problema.
15. Pulsar KINETIC.
16. Al finalizar el tiempo total programado, sonará el avisador durante unos segundos, aparecerá el resultado final en el display y se iluminará el piloto CONC.

TÉCNICA:

1. Preparamos:

2.Mezclamos e incubamos durante 1 minuto.

3. Leemos la absorbancia inicial de la muestra, y cada minuto leer la absorbancia durante 3 minutos.

4. Anotar los resultados.

5. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto.

RESULTADOS

1: 1,833

2:1,821

3:1.811

4:1,799

OPERACIÓN :0,012+0.010= 0.034/3=0.011

0.011X9690= 106.59