PRÁCTICA Nº 23: SEMINOGRAMA

FUNDAMENTO:

El seminograma está indicado para valorar la capacidad reproductora de un varón. También en un estudio post-vasectomía, con la intención de comprobar si los espermatozoides han desaparecido totalmente del eyaculado.

MATERIALES:

Probeta o tubo de ensayo graduado

Papel indicador de pH

Portaobjetos y cubreobjetos

Pipetas Pasteur

Varilla de vidrio

Cámara de Neubauer

Baño termostático

Microscopio

Estufa

Cámara húmeda

REACTIVOS:

Eosina azulada al 1% en agua destilada

Nigrosina al 10% en agua destilada o SSF

Formol al 40%

Bicarbonato sódico

Colorante panóptico rápido o Giemsa

Metanol

Sperm-Mar test

MUESTRA:

Semen

TÉCNICA:

Licuación:

Se realiza por observación, manteniendo la muestra en el baño a 37ºC.

Un aumento del tiempo de licuación hace difícil la fecundación, en cambio, una disminución puede orientar hacia procesos inflamatorios de próstata y vesículas seminales.

Volumen:

Medimos el volumen en probeta o en un tubo de ensayo graduado (precalentados a 37ºC). 

En condiciones normales oscila entre 1.5 mL-6mL.

Color:

Se realiza por observación de la muestra. 

Varía del blanco-opalescente al blanco-amarillento.

Un color claramente amarillento puede deberse a la existencia de pus (piospermia), bilirrubina (ictericia) u observarse después de una abstinencia sexual prolongada. 

Un color rojizo se asocia a la presencia de sangre (hemospermia). 

Un aspecto más o menos transparente puede indicar oligospermia o azoospermia.

Viscosidad: 

Tomamos un poco de la muestra con una pipeta Pasteur y vemos  como gotea la muestra. Normalmente cae gota a gota, o bien formando hilos cortos.

En caso de que caiga en forma de hilo largo, diríamos que la viscosidad está aumentada. Esto puede dificultar el movimiento de los espermatozoides y por lo tanto, el proceso de fecundación.

Una viscosidad disminuida puede asociarse a oligospermia.

Para averiguarla nos ayudamos  de una varilla de vidrio, la introducimos en la muestra y se forma un filamento de 5-10 mm.

PH: 

Con ayuda de tiras de papel indicador, dejamos caer una gota sobre ellas, esperamos unos segundo e interpretamos el color comparándolo con la leyenda de colores del envase. 

Varía entre 7.2 y 8.5.

Valores ácidos indica el predominio de secreciones prostáticas.

EXAMEN MACROSCÓPICO:

Movilidad:

Colocar una gota de semen sobre un portaobjetos previamente precalentado a 37ºC, colocar el cubreobjetos procurando que no se formen burbujas y observar al microscopio con objetivo seco de x40.

Se determina el porcentaje de espermatozoides móviles y sus distintos tipos de movilidad:

Se puede determinar dando el porcentaje de:

Progresivos (%):65%

No progresivos (%):20%

Inmóviles (%):15%

Lo normal es encontrar al menos un 32% de espermatozoides con movimiento progresivo o con un 40% de espermatozoides móviles.

Vitalidad: Prueba eosina-nigrosina. 

Consiste en mezclar 50µL el semen con 50µL de eosina azulada al 1% en agua, esperamos 20-30 segundos y añadimos 100µL de nigrosina al 10% en agua.

A continuación, agitamos y hacemos una extensión a lo largo de todo el porta (debe de ser fina). 

Observamos al microscopio con el objetivo x100.

Los espermatozoides muertos adquirirán una coloración rosada (debido a que su membrana está alterada).

Los espermatozoides vivos quedarán sin teñir.

Para considerar una muestra normal, deben estar vivos (sin teñir) más del 58% de los espermatozoides.

Recuento: 

Se diluye la muestra con la solución de Macomber-Saunders:

En casos de oligospermia, el semen no se diluye.

A continuación, se carga la cámara de Neubauer con semen diluido al 1/21 con la solución anterior, se deja reposar 2 minutos en cámara húmeda y se observa al microscopio con el objetivo x40. 

El recuento se hace en el retículo correspondiente a una de las esquinas.

Número de espermatozoides contados =180

Multiplicamos:

Nº espermatozoides x dilución x 10.000 = 180 x 21 x 10.000 = 16.800.000 espermatozoides/mL

Lo normal es obtener valores superiores a 39 millones por eyaculado.

Morfología:

Realizamos una extensión sobre el portaobjetos con una gota de semen y dejamos que seque al aire perfectamente. Posteriormente fijamos con metanol durante 5 minutos, renovando el alcohol cada minuto y medio. NUNCA debemos fijar con calor. A continuación, teñimos con panóptico rápido. 

Dejamos secar la tinción y observamos al microscopio con el objetivo x100.

Debemos observar al menos 200 espermatozoides, fijándonos en la forma de su cabeza, cuello y cola y observando si existen células inmaduras o deformes. 

Espermatozoides normales: 16%

Espermatozoides anormales: 9%

Según la OMS puede aceptarse como normal todo semen que estuviera por encima del 14% en formas morfológicamente normales.

RESULTADOS:

  VITALIDAD. LOS MUERTOS SE TIÑEN DE ROJO PUSTO QUE LA MEMBRANA ESTA DEBILITADA Y PERIMITE QUE EL COLORANTE ENTE EN EL INTERIOR.