PRÁCTICA Nº 12 HEMOGLOBINA

FUNDAMENTO

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada1,2 .

.MATERIALES:

Reactivo de trabajo

Calibrador

Espectrofotómetro

Cubetas

Micropipetas

REACTIVOS

Reactivo de Drabkin (ferricianuro  de potasio , cianuro de potasio y dihidrogeno fosfato de potasio)

MUESTRA:

Sangre venosa, es recomendable usar anticoagulante EDTA, heparina u oxalato

PROCEDIMIENTO:

-En primer lugar prepararemos nuestro reactivo de trabajo (RT) , para ello mezclaremos 5 ml de agua destilada con 2 gotas de reactivo de Drabkin.

-En segundo lugar procederemos a vertir en tubos de ensayo de plástico un blanco con 2.5 ml de reactivo de trabajo , 2.5 ml de reactivo de trabajo + 10 microlitros de patrón en otro tubo y 2.5 de reactivo de trabajo con 10 microlitros de muestra problema .

-En tercer lugar incubamos a temperatura ambiente durante 3 minutos , posteriormente pasaremos las sustancias a 3 cubetas de espectofotometría diferentes .

-En cuarto lugar mediremos la absorbancia frente al blanco a 540 nm en el espectofotómetro .

RESULTADOS:

Al medir la absorbancia en el espectrofotómetro:

Blanco = 0

Patrón = 0.323

Muestra = 0.351

0.351/ 0.323 X 15 = 16,30 g/dL

SIGNIFICADO CLÍNICO:

La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias. Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud1,5,6.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.