- Objetivo: método Hillmann: la fosfatasa ácida a pH 5 hidroliza el alfa-naftilfosfato o fosfato inorgánico a alfa-naftol.El alfa-naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotizado formando un compuesto coloreado con un pico de absorción a 405 nm.
- Materiales:
- Muestra: suero (libre de partículas y hemólisis).
La fosfatasa ácida en suero es muy inestable, por lo que hay que estabilizar adicionando 50µL de ácido acético (R4) por cada mL de muestra.
- Reactivos:
. R1 (tampón): citrato sódico pH 5.2
. R2 (sustrato): alfa-naftilfosfato. Fast Red TR
. R3 (tartrato): tartrato sódico
. R4 (ácido acético)
- Espectofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm
- Cubetas de 1 cm de paso de luz
- Equipamiento habitual de laboratorio
- Técnica:
1. Condiciones del ensayo:
- Longitud de onda: 405 nm
- Cubeta: 1 cm de paso de luz
- Tª constante: 37ºC
2. Ajustar el espectofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:
4. Mezclar, incubar 5 minutos.
5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto
Significado clínico:
La fosfatasa ácida es una enzima que se encuentra presente en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta en próstata, estómago, hígado, músculo, bazo, eritrocitos y plaquetas.
Niveles elevados de fosfatasas ácidas se encuentran en alteraciones prostáticas como hipertrofia, prostatitis o carcinoma, en enfermedades hematológicas, óseas (enfermedad de Paget) o hepáticas.
Niveles bajos de fosfatasa ácida no tiene significado clínico.
- Resultados:
B:00
1:0.347
2:0.367
3:0.390
C=(69.85)V/L X=3300
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